Інформація

28.2: Регуляція експресії генів у бактерій - Біологія

28.2: Регуляція експресії генів у бактерій - Біологія


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

28.2: Регуляція експресії генів у бактеріях

Завантажте та роздрукуйте цю статтю для особистого наукового, наукового та навчального використання.

Купіть один випуск наук всього за 15 доларів США.

Наук

Том 371, Випуск 6531
19 лютого 2021 року

Інструменти для статей

Будь ласка, увійдіть, щоб додати сповіщення для цієї статті.

Анна Кучина, Леандра М. Бреттнер, Луана Палеологу, Чарльз М. Роко, Олександр Б. Розенберг, Альберто Каріньяно, Райан Кіблер, Метью Хірано, Р. Вільям ДеПаоло, Георг Зеліг

Одноклітинне секвенування MicroSPLiT ідентифікує рідкісні моделі бактеріальної транскрипції.


Анотація

Ренін-ангіотензинова система відіграє головну роль у регуляції артеріального тиску та гомеостазу електролітів у ссавців. У цьому дослідженні ми піддавали трансгенних мишей, які містять геномну конструкцію людського реніну, різноманітним фармакологічним та фізіологічним маніпуляціям, щоб перевірити, чи експресія гена реніну людини та вивільнення активного людського реніну належним чином регулюються в цій моделі. Ці маніпуляції були розроблені для перевірки основних регуляторів вивільнення реніну, включаючи ангіотензин II, щільну жовту пляму, нирковий перфузійний тиск і β-адренорецептори. Ми використовували концентрацію реніну в плазмі людини та рівні мРНК ниркового реніну людини, щоб задокументувати реакцію трансгену на ці подразники. Концентрація реніну у плазмі крові людини збільшувалася у відповідь на інгібування ангіотензинперетворюючого ферменту каптоприлом та ізопротеренолом та зменшувалася після дієти з високим вмістом солі. Дієта з низьким вмістом солі або дефіциту натрію не стимулювала вивільнення реніну. Рівень мРНК реніну людини в нирках підвищився після каптоприлу, але не змінився в інших експериментальних групах. Ми також вимірювали рівні мРНК реніну людини у подвійних трансгенних мишей, які містять той самий ген реніну людини на додаток до гена ангіотензиногену людини. Ці миші мають хронічну гіпертензію і мають підвищений рівень циркулюючого ангіотензину II. Рівні мРНК реніну людини в нирках були парадоксально підвищеними в порівнянні з їх одиничними трансгенними нормотензивними аналогами. Ці трансгенні миші є моделлю для дослідження реніну людини і можуть допомогти з’ясувати молекулярні механізми, які регулюють ген у відповідь на фізіологічні сигнали.

Система ренін-ангіотензин відіграє невід’ємну роль у регуляції АТ та гомеостазі електролітів у ссавців. Також було припущено, що він сприяє регуляції місцевого кровотоку в тканинах і органах аутокринним/паракринним способом і відіграє певну роль у розвитку нирок. Гени ренін-ангіотензинової системи також були пов’язані з гіпертензією або пов’язані з нею на кількох моделях тварин і у людей. 1 2 Ренін, аспартилпротеаза, ініціює ряд протеолітичних реакцій, які призводять до виробництва Ang II, біологічно активного пептиду системи. Хоча регулювання експресії реніну у гризунів добре охарактеризовано, до недавнього часу фізіологічні реакції, що контролюють регуляцію гена hRen, в основному залишалися невивченими через брак людських тканин і адекватних клітинних ліній. Стабільні трансфекції існуючих клітинних ліній, що не експресують ренін, конструкцією гена hRen дали інформацію про внутрішньоклітинний процесинг і секрецію реніну, 3 але оскільки ці клітини не виділяють ендогенно вироблений ренін, не можна з упевненістю сказати, чи містять ці клітини всі фактори, необхідні для правильної регуляції експресії гена реніну. Недавній опис клітинної лінії карциноми легенів людини, Calu-6, яка ендогенно секретує ренін, може забезпечити систему для дослідження регуляції гена реніну в середовищі клітинної культури. 4 Тим не менш, система in vivo забезпечила б більш ідеальну модель для вивчення регуляції гена реніну, а створення трансгенних тварин, що містять ген hRen, забезпечило ці моделі. Як на моделях трансгенних мишей, так і трансгенних щурів, було показано, що експресія мРНК hRen має відповідну тканинну та клітинну специфічність. 5 6 7 8 Крім того, було вивчено базову фізіологічну регуляцію, таку як реакція на виснаження натрію 9 або інгібування ангіотензин-перетворюючого ферменту, 5 10, але широке дослідження регуляції генів у трансгенних тварин не проводилося. Експресія гена реніну та секреція білка, наприклад, негативно регулюються петлею зворотного зв’язку Ang II, підвищенням ниркового перфузійного тиску, системного артеріального тиску та вмісту натрію в плазмі, що визначається щільною жовтою плямою. 11 З іншого боку, експресія і секреція генів реніну посилюються збільшенням активності ниркових нервів, зниженням вмісту натрію в плазмі та активацією β-адренергічних рецепторів. Більше того, якщо ми хочемо використовувати трансгенні моделі для подальшого розуміння регуляції експресії генів реніну та генетики гіпертонії, стає критично важливим визначити, чи реагують трансгени на відомі фізіологічні та фармакологічні стимули. Таким чином, метою цього дослідження було вивчити регуляцію мРНК hRen та активну секрецію hRen у відповідь на різноманітні фізіологічні та фармакологічні стимули у трансгенних мишей, які містять ген hRen окремо, або у подвійних трансгенних гіпертензивних мишей, що містять як hRen, так і hAng. гени.

Методи

Створення трансгенних мишей, догляд за мишами та тваринництво

Як hRen, так і hAng трансгенних мишей були створені та охарактеризовані, як описано раніше. 5 12 Подвійні трансгенні миші були створені шляхом розведення гетерозиготних трансгенних мишей hRen з гетерозиготними трансгенними мишами hAng. 13 Двадцять п'ять відсотків нащадків були подвійно трансгенними. Трансгенну лінію hRen 9 та трансгенну лінію hAng 204/1 використовували для створення подвійних трансгенних мишей. Позитивних трансгенних мишей диференціювали від нетрансгенних однопослідників за допомогою полімеразної ланцюгової реакції геномної ДНК, очищеної із зразків біопсії хвоста з використанням видоспецифічних праймерів hRen та hAng, як описано раніше. 5 12

Усіх мишей годували стандартною їжею для мишей і водою ad libitum, якщо інше не зазначено в протоколі експерименту. Догляд за мишами відповідав або перевищував стандарти, встановлені Національними інститутами охорони здоров’я Інструкції з догляду та використання піддослідних тварин. Процедури були схвалені Університетським комітетом з догляду та використання тварин Університету Айови.

Мишей вбили CO2 асфіксія. Приблизно 0,5 мл свіжої крові було отримано з аорти і поміщено в охолоджені пробірки, що містять 2,5 мкл 0,5 моль/л ЕДТА. Зразок негайно крутили в попередньо охолодженій центрифузі при 14 000 об/хв протягом 5 хвилин і отримували зразок плазми об’ємом 150 мкл і негайно заморожували при -80°C до радіоімунного аналізу. Зразки нирок брали відразу після смерті, миттєво заморожували на сухому льоду і зберігали при -80°C. Перед заморожуванням видаляли весь навколонирковий жир і капсульну тканину.

Експериментальні протоколи

Трансгенних мишей і нетрансгенних контрольних однопослідників помістили в такі експериментальні групи:

A. Без лікування: Миші в цій групі (n=10 hRen лінія 9, n=17 hRen лінія 10, n=7 контролю) отримували стандартну їжу для мишей і воду ad libitum без додаткових обробок або заходів перед смертю. Звичайна їжа містила 0,31% натрію та 0,48% хлориду (Teklad LM-485).

B. Лікування каптоприлом: каптоприл розчиняли у питній воді (0,5 мг/мл) для отримання приблизно 100 мг/кг каптоприлу на добу. Лікування тривало 10 днів (n=5 годRen, лінія 10, n=5 контроль).

C. Лікування каптоприлом/малим вмістом солі: каптоприл розчиняли у питній воді для отримання приблизно 100 мг/кг каптоприлу на добу. 5 Крім того, мишей годували дієтою з низьким вмістом солі (Теклад № 7034), що містить 0,08% натрію та 0,13% хлориду. Лікування тривало 10 днів (n=9 hRen, рядок 9, n=6 hRen, рядок 10, n=6 контролю).

D. Дієта з низьким вмістом солі: миші отримували лише дієту з низьким вмістом солі (Теклад № 7034) протягом 10 днів (n=5 hRen, рядок 9, n=4 hRen, рядок 10, n=3 контролю). 9

E. Дієта з високим вмістом солі: Миші отримували дієту з високим вмістом солі (Теклад № 7033), що містить 3,18% натрію та 4,91% хлориду протягом 10 днів (n=4 hRen, лінія 9, n=7 hRen, лінія 10, n=4 контролю).

F. Дієта без солі: Миші отримували дієту з дефіцитом натрію (Teklad TD 90228), що містить 0,01% натрію та 0,05% хлориду протягом 10 днів (n=6 годинRen, лінія 10, n=2 контролю).

G. Дієта без солі плюс фуросемід: миші отримували дієту з дефіцитом натрію (Teklad TD 90228) протягом 10 днів і 20 мг/кг фуросеміду IP на 3, 5 і 10 дні лікування (n=8 годинRen, лінія 10, n= 7 елементів керування). 14 15

H. Ізопротеренол: Миші отримували 250 мкг/кг ізопротеренолу SC за 15 хвилин до смерті (n=3 hRen, рядок 9, n=6 hRen, рядок 10, n=3 контролю). 16

I. Ізопротеренол/пропранолол: Миші отримували 10 мг/кг пропранололу SC за 5 хвилин до 250 мкг/кг ізопротеренолу SC. 17 Мишей загинули через 15 хвилин після ін'єкції ізопротеренолу (n=4 hRen, лінія 10, n=2 контролю).

J. Реакція на хронічну гіпертензію: подвійні трансгенні миші, що містять трансгени hRen і hAng (лінія hRen 9×hAng лінія 204/1, n=8), разом з контрольними мишами лінії 9 hRen (n=8) були вбиті та досліджені їх тканини . Обидві групи отримували звичайну їжу.

Аналіз PRA

Ми проводили аналізи PRA та PRC за допомогою набору для радіоімунного аналізу RIANEN Ang I 125 I (DuPont), дотримуючись інструкцій та використовуючи реагенти, надані виробником. Набір був розроблений для забезпечення оптимального pH для перетворення ангіотензиногену в Ang I та для інгібування ангіотензинази. Попередня робота в нашій лабораторії продемонструвала, що рівні Ang I залишалися стабільними протягом кількох годин інкубації при 37°C, демонструючи відсутність ангіотензиназ у зразках. 12 Усі зразки заморожували та розморожували один раз. Для аналізу зразки плазми розморожували на крижаній бані. Після розморожування до плазми додавали 3 мкл димеркапролу, 3 мкл 8-гідроксихіноліну та 300 мкл малеатного буфера (всі реагенти були отримані за допомогою набору для радіоімунного аналізу). Потім зразки розділили на чотири пробірки. Пробірку А інкубували при 4°C без додаткових добавок. Пробірку B інкубували при 4°C з додаванням 1 мкг очищеного hAng (Scripps Laboratories). Пробірку С інкубували при 37°С без додаткових добавок. Пробірку D інкубували при 37°C з додаванням 1 мкг hAng. Зразки інкубували протягом 1 години, а потім проводили радіоімунний аналіз згідно з протоколом, наданим виробником. Зразки відповідним чином розбавляли холостим реагентом, щоб результати радіоімунного аналізу були на лінійній частині стандартної кривої. Кількість Ang I, що утворюється в кожному зразку, була отримана шляхом порівняння зі стандартною кривою, що формується кожного разу під час виконання аналізу. mPRA було отримано шляхом віднімання кількості Ang I, що утворюється на мілілітр на годину в пробірці A (4°C без добавок) від кількості в пробірці C (37°C без добавок). hPRC було отримано шляхом віднімання mPRA (Пробірка C-Tube A) із значення, отриманого шляхом віднімання кількості Ang I, що генерується на мілілітр на годину в пробірці B (4°C плюс 1 мкг hAng) від кількості Ang I, що генерується на мілілітр на годину в пробірці B (4°C плюс 1 мкг hAng) від кількості Ang I, що генерується на мілілітр на годину в пробірці B (4°C плюс 1 мкг hAng) від величини в пробірці D (37° C плюс 1 мкг hAng): hPRC=[(пробірка D-пробірка B)-(пробірка C-пробірка A)]. Кількість Ang I, що утворюється у зразках при температурі 4°C (пробірки A і B), зазвичай становила від 10% до 15% від значень зразків при температурі 37°C. Це відображає активність реніну при 4°C або ендогенний рівень Ang I у зразках плазми. Хоча було б краще порівнювати mPRC з hPRC, mPRA було виміряно з кількох причин. По-перше, нефректомізовану плазму миші потрібно використовувати як субстрат для реакції. Нефректомія у мишей технічно складна, але її можна виконати. Тим не менш, численні попередні дослідження показали, що нефректомія у мишей збільшує PRA і призводить до вивільнення прореніну з ряду позаниркових ділянок 18 19, незрозуміло, чи суттєво змінить результати присутність прореніну в плазмі субстрату. Ми також розглядали можливість додавання нефректомізованої плазми іншого виду, наприклад щурів, як джерела ангіотензиногену, але пов’язані з видами відмінності в кінетиці реакції між реніном та ангіотензиногеном були серйозною проблемою. Дійсно, було показано, що mRen має підвищену каталітичну активність щодо ангіотензиногену щурів. 20 Використання плазми іншого виду, наприклад овець, не дозволить нам відрізнити mRen від hRen. Таким чином, mPRA використовувався для демонстрації активності, що генерує Ang I, ендогенного гена mRen.

Ми провели кілька контрольних експериментів для підтвердження наших вимірювань PRA та PRC. По-перше, ми продемонстрували в експерименті з тривалим курсом часу, що рівні Ang I збільшувалися лінійно з часом (до 6 годин). Це було правдою, коли вимірювали активність як mRen, так і hRen. Ці результати вказують на те, що ми працювали з початковою швидкістю реакції ренін-ангіотензиноген і що субстрати реакції, ангіотензиноген миші та hAng, не були в граничних кількостях (дані не показані). По-друге, не було доказів додаткової продукції Ang I у зразках трансгенних мишей, інкубованих у присутності 1,0 або 5,0 мкг очищеного hAng. По-третє, щоб переконатися, що спостережувані результати не були артефактами процесу забору крові, ми продемонстрували, що не було різниці в mPRA та hPRC із зразків плазми, отриманих шляхом орбітальної кровотечі ока у анестезованих мишей, порівняно зі зразками плазми, отриманими з аорти у евтаназованих мишей. . Також не було різниці у значеннях mPRA та hPRC ні для свіжої плазми, ні для одноразово замороженої плазми.

Для цілей визначення PRA вимірює загальну активність утворення Ang I в плазмі і залежить від концентрації циркулюючого реніну та ангіотензиногену. PRC є мірою концентрації реніну в плазмі на основі Ang I, що утворюється в присутності надлишку субстрату. mPRA в цих експериментах забезпечив важливий контрольний захід, який дозволив нам оцінити величину відповідей на описані експериментальні методи лікування.

Тест захисту РНКази

Експресія мРНК hRen і миші рен-1 с в нирках визначали за допомогою аналізу захисту РНКази. Використаними зондами були часткова кДНК hRen з координатами 741-1148, клонована в pSL301 (Invitrogen), часткову мишу. рен-1 с кДНК з координатами 178-657 клонували в pCRII (Invitrogen) і часткову мишачу кДНК β-актину, отриману від виробника (Ambion). Загальну РНК виділяли із зразків нирок гомогенізацією в ізотіоціанаті гуанідинію з подальшою екстракцією фенольною емульсією при рН 4,0 з використанням модифікації методу, описаного раніше. 10 Гомогенізації були збільшені до 2,5 мл, щоб збільшити вихід і якість РНК. Зразки (10 мкг) загальної РНК нирок були гібридизовані з одноланцюговими міченими антисмисловими РНК-зондами, створеними РНК-полімеразою Т3 за допомогою набору Maxiscript (Ambion). Захист РНКази відповідав опису виробника. Продукти захисту візуалізували за допомогою електрофорезу через поліакриламід (5%)/сечовину (8 моль/л), які фіксували та сушили для авторадіографії.

Статистичний аналіз

Аналіз даних між різними групами лікування проводили за допомогою одностороннього ANOVA, при цьому групи лікування порівнювали з контрольною групою, що не отримувала лікування. Окремі методи лікування також порівнювали попарно з контрольною групою з використанням непарних т контрольна (Студентська). Ми розглянули значення П<.05 стати статистично значущим. Усі значення виражені як середнє ± SE.

Результати

Регламент випуску hRen

Ми виміряли базові mPRA та hPRC у двох незалежних лініях трансгенних мишей, щоб виключити вплив положення на експресію трансгену (рис. 1). Ендогенний mPRA був подібним в обох лініях (14,2±3,1 нг Ang I/мл на годину для рядка 9 і 8,6±0,9 для рядка 10), а mPRA не відрізнявся суттєво між трансгенними та нетрансгенними контролями однопослідників (14,2±3,1 проти 11,1±1,9). , відповідно для рядка 9 і 8,6±0,9 проти 12,4±5,5 для рядка 10). Трансгенні миші мали вимірний активний hRen, який суттєво не відрізнявся між двома лініями (10,9±1,2 для лінії 9 проти 11,6±1,0 для лінії 10). По суті, активності hRen не спостерігали у нетрансгенних однопослідників жодної лінії. Ці результати свідчать про те, що активний hRen вивільняється в системний кровообіг цих мишей.

Ми дослідили регуляцію вивільнення hRen у мишей, які отримували і не отримували лікування, як описано в розділі «Методи». Ці результати показані для лінії 10 hRen на рис. 2 і підсумовані разом з усіма даними PRA в таблиці. hRen PRC був високо підвищений у трансгенних мишей, які отримували тільки каптоприл, а також у мишей, яких годували дієтою з низьким вмістом солі в поєднанні з каптоприлом. Сама по собі дієта з низьким вмістом солі не підвищила hPRC. Подальші спроби виснаження натрію шляхом годування мишей дієтою без солі або дієтою без солі плюс фуросемід не змінили hPRC. Існувала чітка тенденція до зниження hPRC у мишей із високим вмістом солі. Лікування ізопротеренолом призводило до підвищення hPRC, яке було заблоковано попередньою обробкою мишей пропранололом. Зміни в hPRC у відповідь на експериментальне лікування в лінії hRen 9 значною мірою співпадали зі змінами, що спостерігалися в лінії hRen 10 (Таблиця ). Також не було значущих відмінностей у mPRA в групах, які не отримували лікування, каптоприл, каптоприл плюс низький вміст солі, низький вміст солі, безсолі плюс фуросемід, високий вміст солі, ізопротеренол та пропранолол плюс ізопротеренол, коли трансгенних мишей порівнювали з нетрансгенними контрольними. Була відзначена невелика, але значна різниця в mPRA між трансгенними та нетрансгенними мишами, які не отримували солі (П<.05).

Регуляція експресії hRen в нирках

Ми дослідили рівні hRen і mRen мРНК захисту РНКази в нирках трансгенних і нетрансгенних мишей, які не отримували лікування і тривало лікування (рис. 3). У трансгенних мишей чітко виявлялася мРНК hRen, а в нетрансгенних контролях не спостерігалося експресії hRen, що підтверджує, що зонд специфічно виявляв hRen, але не мРНК mRen. ІРНК mRen була очевидною як у трансгенних, так і в нетрансгенних зразках, коли використовувався специфічний для mRen мРНК РНКазний захисний зонд (рис. 3). Рівні мРНК hRen були значно підвищені у мишей, які отримували каптоприл, але не змінювалися в інших групах лікування, що значною мірою узгоджувалося з даними hPRC, отриманими від мишей, які постійно отримували лікування. Рівні мРНК mRen були аналогічним чином підвищені у мишей, які отримували каптоприл, але не змінювалися в інших групах лікування. Ми не досліджували експресію hRen в нирках у групах лікування гострої форми (ізопротеренол і пропранолол), оскільки ми не очікували змін рівня мРНК hRen протягом короткого періоду часу (15 хвилин) експериментів.Ниркові рівні мРНК hRen були рівними в hRen лінії 9 та hRen лінії 10, і обидві лінії однаково кількісно реагували на експериментальне лікування (дані не показані).

Щоб оцінити відповідь мРНК hRen на підвищений АТ, ми створили подвійних трансгенних мишей, які містили як гени hRen, так і hAng. Ці подвійні трансгенні миші мають хронічну гіпертензію (середній артеріальний тиск, 150,6±5,0 мм рт.ст. проти 111,1±5,6 у одиночних трансгенних мишей hRen) 13 і мають підвищений рівень циркулюючої Ang II (340±58 проти 99,8±13,2 пг/м). Як підвищений артеріальний тиск, так і висока циркуляція Ang II теоретично повинні знижувати синтез і вивільнення реніну. Тим не менш, стабільна мРНК hRen була значно підвищена у подвійних трансгенних мишей порівняно з одиночними трансгенними контролями (рис. 4). Цікаво, що рівні мРНК mRen були належним чином знижені цими стимулами (рис. 4).

Обговорення

Регулювання вивільнення hRen та мРНК у відповідь на експериментальні маніпуляції

Метою цього дослідження було вивчити регуляцію експресії та секреції hRen у відповідь на різноманітні фізіологічні та фармакологічні маніпуляції у трансгенних мишей. Попередні дослідження показали, що трансгенні миші, що містять геномну конструкцію, що складається з усіх екзонів та інтронних послідовностей і фланковані відносно невеликою кількістю висхідної (900 bp) і нижче (400 bp) ДНК hRen, демонстрували тканиноспецифічну та клітинно-специфічну модель експресії. значною мірою відповідає експресії генів реніну у гризунів. 5 6 Оскільки кількість 5′ фланкуючої ДНК, використаної в конструкції, була досить невеликою, ми хотіли визначити, чи здатний ген реагувати на фізіологічні сигнали, які зазвичай регулюють експресію та вивільнення реніну.

У дослідженнях, проведених з окремими трансгенними мишами, вивільнення активного hRen стимулювали в умовах інгібування ангіотензин-перетворюючого ферменту каптоприлом або лікування ізопротеренолом. Рівень стаціонарної мРНК hRen також був підвищений у мишей, які отримували каптоприл. Ці зміни відображали реакцію ендогенної мРНК і білка mRen на ці лікування. Вважається, що Ang II бере участь у петлі зворотного зв’язку, яка регулює вивільнення та експресію реніну, діючи через рецептор-залежний механізм ангіотензину типу 1. 21 22 23 24 Хоча це імовірно відбувається безпосередньо на юкстагломерулярних клітинах, немає достатніх доказів, які б підтвердили це безпосередньо. На основі цієї моделі мРНК hRen і вивільнення повинні збільшитися у мишей, які отримували каптоприл, через полегшення опосередкованого Ang II придушення зворотного зв’язку. mPRA і mRen мРНК також були аналогічним чином збільшені у мишей, які отримували каптоприл, хоча збільшення mPRA було не таким значним, як при hPRC. Це, швидше за все, пов’язано з тим, що інгібування ангіотензин-перетворюючого ферменту не тільки зменшує циркулюючу Ang II і збільшує синтез і вивільнення реніну, але також зменшує вироблення і вивільнення ангіотензиногену, що зменшує активність утворення Ang I. На значення hPRC це не вплинуло, оскільки ми додали надлишок екзогенного hAng до плазми для визначення PRC.

Активація β-адренергічних рецепторів циркулюючим адреналіном або вивільненням норадреналіну з ниркових симпатичних нервових закінчень повинна стимулювати вивільнення реніну та збільшувати мРНК реніну через цАМФ-залежний шлях. 25 26 У наших експериментах ми продемонстрували, що циркулюючий рівень hRen підвищувався у відповідь на ізопротеренол і що відповідь була специфічно опосередкована рецептором шляхом блокування відповіді попереднім введенням антагоніста β-адренергічних рецепторів пропранололу. Ми не визначали мРНК реніну в цій експериментальній групі, оскільки не передбачали, що 15-хвилинна гостра терапія вплине на рівень мРНК реніну в рівноважному стані. Більше того, прямі рецептор-опосередковані стимулюючі ефекти хронічного лікування ізопротеренолом на рівні мРНК реніну слід інтерпретувати в контексті його ефектів, що підвищують АТ. Зараз ми проводимо експерименти для вимірювання ефекту хронічної стимуляції β-адренергічних рецепторів за умов, коли АТ не підвищується при одночасному застосуванні вазодилататора.

З усіх результатів, представлених у цьому звіті, найважче узгодити дані, отримані від груп із високим, низьким рівнем і відсутністю солі. Як і очікувалося, миші, яких годували дієтою з високим вмістом солі протягом 10 днів, показали невелике, але значне зниження hPRC, імовірно, через активацію механізмів macula densa. 27 28 Проте стаціонарний стан мРНК hRen у групі з високим вмістом солі не знизився суттєво. Очевидні пояснення можуть відображати коротку тривалість лікування (10 днів) та обмеження у виявленні невеликої зміни мРНК hRen нирок, що корелює лише з 30% зниженням рівня активного hRen у плазмі крові. На відміну від групи з високим вмістом солі, обмеження споживання натрію шляхом годування мишей з низьким вмістом солі або дієти з дефіцитом натрію протягом 10 днів не впливало на рівні hPRC або ниркової мРНК hRen. Більше того, не було додаткового впливу на рівні hPRC використання діуретиків у мишей, яких годували дієтою з дефіцитом натрію, хоча в трансгенній групі було відзначено помірне збільшення mPRA (Таблиця ). У щурів ці лікування зазвичай призводять до значного збільшення PRA та мРНК ниркового реніну. Той факт, що рівні mPRA і hPRA збігалися протягом цих експериментів, виключає можливість того, що в людському гені відсутні відповідні регуляторні елементи, які реагують на сигнали від щільної жовтої плями. Натомість результати показують, що або величина, або тривалість лікування мишей повинні бути значно збільшені, або що миші більш стійкі до змін натрію в їжі. Цікаво, що 10 днів високого вмісту натрію в їжі не підвищують АТ у кількох штамів мишей (D.C. Merrill and C.D.S., неопубліковані результати, 1995). У майбутніх експериментах буде критично важливим вимірювання екскреції натрію та натрію в плазмі з сечею, щоб підтвердити ефективність нашого дієтичного режиму щодо модуляції рівня натрію в плазмі.

Важливо також зазначити, що ми не можемо виключити позанирковий ренін як джерело реніну плазми у трансгенних мишей. Дійсно, hRen експресується в різних тканинах, крім нирок, включаючи легені, репродуктивні тканини та жирову тканину. 5 Попередні дослідження на гризунах і великих ссавців чітко демонструють, що позаниркові тканини виділяють проренін, а клітини Calu-6, які походять з легенів людини, експресують мРНК hRen ендогенно, але виділяють лише проренін в середовище (DF Catanzaro і CDS, неопубліковані результати, 1995 р. ). Хоча підщелепна залоза може бути джерелом позаниркового реніну у штамів мишей, які містять Рен-2 гена мишей, використаних у наших дослідженнях, підтримували на генетичному фоні C57BL/6, якого бракує Рен-2 і має у 100 разів нижчий рівень мРНК реніну підщелепної залози. 29 30 Більше того, в підщелепній залозі лінії 9 немає мРНК hRen і лише низькі рівні в рядку 10. Ренін, отриманий з підщелепної залози, навряд чи буде відповідальним за наші спостереження, оскільки величина відповідей у ​​двох лініях була однаковою.

Регуляція мРНК hRen у відповідь на підвищений Ang II і високий АТ

Найцікавіші результати, отримані на даний момент, були знайдені при порівнянні рівнів мРНК ниркового реніну у гіпертензивних подвійних трансгенних мишей та їх одномісних трансгенних аналогів hRen. Очевидно, очікувалося, що хронічна гіпертензія запустить барорецепторні механізми, а підвищений рівень Ang II у плазмі запускає петлю зворотного зв’язку Ang II, щоб спричинити значне зниження регуляції ниркової мРНК hRen у подвійних трансгенних мишей. Дійсно, ми показали, що експресія ендогенної мРНК mRen пригнічена у подвійних трансгенних мишей. Ці результати свідчать про те, що механізми, які зазвичай відповідають за регуляцію мРНК реніну у відповідь на високий АТ або високий рівень циркулюючої Ang II, неушкоджені.

Головне питання, яке у нас залишилося, полягає в тому, який механізм викликає підвищення рівня мРНК hRen в нирках подвійних трансгенних мишей? По-перше, малоймовірно, що відмінності експресії або ефекти положення між лініями є відповідальними, оскільки одна і та ж лінія hRen була використана як для одиночних трансгенних мишей hRen, так і для подвійних трансгенних мишей. Цікаво, що Lee та співавтори 31 помітили, що експресія як ендогенного щурячого реніну, так і генів mRen була пригнічена в нирках на початковому рівні у трансгенних щурів з гіпертензією TGR(mREN-2)27, які містили миші. Рен-2 ген. Інгібування ангіотензин-перетворюючого ферменту знімало супресію обох генів реніну та знижувало АТ, але лише зниження АТ без зміни рівня Ang II не збільшувало експресію жодного з генів реніну. Автори припустили, що локально генерований Ang II може пригнічувати експресію гена реніну, незважаючи на те, що системний АТ було знижено. Ці результати узгоджуються з короткою зворотною регуляцією реніну Ang II і підтримують концепцію генерації Ang II у локальній тканині. Тим не менш, локальні фактори, що модулюють відповідь гена реніну, не можуть пояснити диссинхронію відповідей генів hRen і mRen, що спостерігаються в нашій моделі.

Наші результати можна пояснити, якщо трансгенна конструкція, використана в цих експериментах, не містить усіх відповідних регуляторних елементів, необхідних для регулювання експресії гена реніну у відповідь на підвищення АТ та/або збільшення циркулюючої Ang II. Справді, використаний трансген містить лише 896 bp 5' фланкуючої ДНК. До 4,6 kb 5′ фланкуючої ДНК промотору mRen потрібно, щоб націлити відповідну експресію самостійно у трансгенних мишей. 32 33 Можливо, регуляторна область, яка контролює реакцію на ці стимули, розташована далі за течією. Однією з труднощів цієї інтерпретації є те, що рівень експресії гена hRen значно підвищився у відповідь на інгібування ангіотензин-перетворюючого ферменту. Це свідчить про можливість того, що регуляторні елементи, відповідальні за контроль реакції гена реніну на зниження циркулюючої Ang II (як у мишей, які отримували каптоприл), чітко відрізняються від тих, що контролюють відповідь через підвищення АТ (або збільшення Ang II). Також можливо, що збільшення мРНК реніну через каптоприл і зниження, зазвичай викликане барорецепторними механізмами та петлею зворотного зв’язку Ang II, діють за допомогою різних механізмів, таких як транскрипційні та посттранскрипційні механізми. Вважається, що збільшення мРНК реніну у відповідь на підвищення цАМФ частково пояснюється зниженням обороту мРНК реніну в юкстагломерулярних клітинах 34 миші та клітинах Calu-6 людини. 35 Зараз ми перевіряємо деякі з цих гіпотез шляхом створення додаткових трансгенних мишей з конструкціями, які містять як збільшену (5 і 22 kb), так і зменшену (149 bp) кількість фланкуючих послідовностей вище по ходу. Ми також експериментально визначаємо, чи високі рівні циркулюючого Ang II з гіпертензією та без неї відповідають за наші спостереження.


28.2: Регуляція експресії генів у бактерій - Біологія

Видавець: Horizon Scientific Press
Автори: Аніл Кумар Університету Деві Ахілія, Індор-452017, Індія та А.К. ШриваставаІндійського інституту ветеринарних досліджень, Ізатнагар-243122, Індія
Дата публікації: серпень 2001 року
ISBN-10: 1-898486-28-X (hbk)
ISBN-13: 978-1-898486-28-2 (hbk)
Сторінки: viii + 152

Цей том являє собою чудовий огляд обраних передових тем з молекулярної біології. Ця книга розрахована на всіх аспірантів, дослідників, викладачів, редакторів тощо, які працюють у цій галузі або взаємодіють з молекулярними біологами. Перша сторінка кожного розділу містить зміст, який надає "короткий погляд" керівництво до всього розділу. Кожен розділ містить вступ, який коротко викладає основні поняття та пропонує більш чітке розуміння предмета. Книга відкривається розділом про організацію ДНК в геномі еукаріотів і продовжується розділами про реплікацію ДНК (прокаріотична та еукаріотична), транскрипцію, механізми сплайсингу, процесинг РНК у еукаріотів, регуляцію експресії генів (у прокаріотів та еукаріотів). , а також транспозони та механізми транспозиції. Для пояснення основних термінів, які використовуються в молекулярній біології, додано глосарій. Важливий том для тих, хто бажає отримати фундаментальні знання в цій області.


Промислова біотехнологія та товарна продукція

3.28.2 Отримання тонких хімічних речовин з відновлюваної сировини

Підраховано [12], що використовується лише 3% виробленої біомаси. Ця біомаса складається з 75% вуглеводів і 20% лігніну, а решта 5% - з олії, жирів, білків і терпенів. Як наслідок, першим кроком у біопереробному заводі є ферментація целюлозних і лінгоцелюлозних матеріалів для отримання високомолекулярних продуктів, що виділяються клітинами, таких як ферменти або полісахариди. Потім виробництво невеликих молекул, таких як первинні метаболіти – оцтова кислота, ацетон, амінокислоти, лимонна кислота, вітаміни тощо – та вторинних метаболітів – антибіотиків, барвників, пігментів та ароматичних сполук, є другим етапом біопереробки.

Найбільш описуваним прикладом є вироблення β-лактамної структури [4, 13]. Інші типові приклади цих процесів описані в наступних параграфах. Біотрансформації, що каталізуються бактеріями, грибами або мозоль були представлені як репрезентативні приклади застосування біотехнології в цій галузі.

3.28.2.1 Етанол

Етанол є найбільшою невеликою сполукою, отриманою в тоннах шляхом анаеробної ферментації біомаси (24 000 тонн на рік -1 [13] ). Більша частина біоетанолу використовується як транспортне паливо для зменшення використання викопного палива та глобального викиду CO.2 викиди. Тим не менш, варіант промислового виробництва етанолу розглядається все далі і далі.

3.28.2.2 Молочна кислота

Молочна кислота використовується з 1990-х років як тонкодисперсна хімічна речовина (виробництво 60 000–80 000 тонн на рік -1 ). Переважна частка (25 000 тонн на рік −1) використовується як добавка в харчовій промисловості. Друге основне застосування - це як будівельний блок для зелених полімерів, розчинників і пластифікаторів. Молочна кислота виробляється хімічним шляхом гідроціанування ( Фігура 1 ) з подальшим гідролізом ціаногідрину. Основними недоліками є маніпулювання ціаністим воднем (HCN), виробництво (NH4)2ТАК4 (1 екв.), а також комплексні етапи очищення для отримання харчової молочної кислоти, оскільки отримують рацемову кислоту. Для подолання цих труднощів використовують анаеробне бродіння з вуглеводів Lactobacillus delbrueckii є гарною альтернативою, оскільки лише (С)-молочну кислоту отримують лише за одну стадію. Ферментацію проводять при 50 °С протягом 2–8 діб з виходом 85–95 % і концентрацією продукту 100 г/л. Ізоляція (С)-молочну кислоту з біомаси легко, використовуючи звичайні методики.

Фігура 1 . Порівняння хімічного та ферментаційного виробництва (С)-молочна кислота.

3.28.2.3 Шикімова кислота

Шикімова кислота (SA) нещодавно стала ключовим проміжним продуктом у синтезі противірусного препарату Таміфлю ® . Приготування СА з використанням кишкова паличка mutants є хорошою альтернативою виділенню SA з плодів Ілліцій рослини (мг кг −1 біомаси). Ці мутанти блокували кіназу SA в поєднанні з мутагенезом для збільшення виробництва SA ( Малюнок 2 ). SA секретується в культуральне середовище (27 г л -1 ) у супроводі дегірошікімової кислоти (DHS) (< 4 г л -1 ) і хінної кислоти (QA) (< 13 г л -1 ) як вторинних продуктів.

Малюнок 2 . Біосинтез шикімової кислоти, ключового проміжного продукту в приготуванні Таміфлю ® .

3.28.2.4 л -Триптофан

l-триптофан (l-Trp) є незамінною амінокислотою, яка використовується як харчова та кормова добавка та в медичних цілях. Хоча протягом останніх кількох років було проведено багато досліджень для отримання цієї дорогої амінокислоти, для l-Trp не існує вигідного хімічного процесу. Генетично модифікований (ГМО) Corynebacterium glutamicum і кишкова паличка були використані в біосинтезі l-Trp з хоризмової кислоти (CHA). Ці ГМО мають стійку до зворотного зв’язку D-рибозилантранілфосфатсинтазу (DAHP-синтазу) та ферменти в шляху Trp, звільнені від регуляції ( Малюнок 3 ). Продуктивність коливається від 45 г л -1 до 58 г л -1 .

Малюнок 3 . Біосинтез l -Trp з використанням генетично модифікованих мікроорганізмів (ГМО).

3.28.2.5 Рибофлавін (вітамін В2)

Рибофлавін (вітамін В2) є важливим поживним фактором для людей і тварин, яким він необхідний як попередник флавопротеїнів. Рибофлавін хімічно отримують з d-рибози за допомогою тривалого і виснажливого процесу Каррера-Тішлера. У цьому процесі загальний вихід 60% можна отримати за допомогою багатьох органічних розчинників і етапів захисту/зняття захисту. Рош у співпраці з OmniGene провів біосинтез з використанням ГМО. Ключем до успіху була дерегуляція генів, заміна нативних промоторів конститутивними та збільшення кількості копій генів. Переробка рибофлавіну після ферментації є легкою, оскільки рибофлавін випадає в осад із ферментаційного бульйону, а кристали збираються центрифугуванням (чистота > 95%). Після звичайної кристалізації можна досягти чистоти >99% ( Малюнок 4 ).

Малюнок 4 . Схема біосинтезу рибофлавіну.

3.28.2.6 Аромати з натуральних продуктів

Монотерпени — важливі запашні молекули, широко поширені в природі (понад 400 структур), які парфумерна промисловість може виділити з листя, квітів і плодів багатьох рослин. Крім того, вони є придатними вихідними матеріалами для біотехнологічного виробництва природних ароматичних хімічних речовин, корисних у харчовій або фармацевтичній промисловості. У цьому сенсі біоконверсія терпенів відіграє важливу роль, оскільки селективна хімічна функціоналізація віддаленого CH2 важко досягнути. Навпаки, він може бути біокаталітично функціоналізований з високою регіо- та стереоселективністю, як це відбувається, наприклад, при використанні монооксигеназ [14].

Гераніол і нерол ( Малюнок 5 ), суміш обох (цитрол) і суміш альдегідів (цитраль) можна трансформувати в 6-метил-5-гептен-2-он шляхом спороутворення поверхневих культур Penicillium digitatum. Ці спори зберігали свою здатність до біотрансформації протягом щонайменше 6 тижнів, що робить біоокислення промислово привабливим.Цитраль, ароматичний терпен, який надає характерний лимонний аромат таким рослинам, як лимонна трава, є відносно недорогим з’єднанням і є важливим інгредієнтом у парфумерній промисловості, що використовується для синтезу енантіомерів ментолу.

Малюнок 5 . Будова деяких монотерпенів, що представляють промисловий інтерес.

Ще одна цікава ароматична сполука (Р)-(+)-лімонен ( Малюнок 5 ), яку можна отримати з масла апельсинової кірки. Біотрансформація цього монотерпену базидіоміцетом Pleurotus sapidus призвело до цис/пер-карвеол і карвон ( Малюнок 5 ) як основні продукти. (С)-Карвон (смак кмину) і (Р)-карвон (аромат, схожий на м'яту) є важливими ароматичними сполуками для харчових продуктів і напоїв. Обидва стереоізомери можна стерео- та хемоселективно відновити за допомогою грибів [15].

3.28.2.7 Сесквітерпени, дитерпени та інші високотерпени

Високі терпени отримують з рослин і виявляють цікаві властивості в медичній хімії [14]. Деякі цікаві біотрансформації цих вторинних метаболітів наведено в наступних параграфах.

Ниткоподібні гриби Bipolaris sorokiniana ефективно виробляє біотрансформацію α-бісабололу ( Малюнок 6 ) до бісаболол-оксиду B. α-бізаболол є економічно цікавим завдяки своєму ніжному квітковому запаху та протизапальній та антисептичній дії. Тому він широко використовується у фармацевтичній промисловості. У цій методології висока регіо- та стереоселективність, що спостерігається при синтезі одного діастереоізомеру бісаболол-оксиду В, разом з високим виходом (84%) роблять цю біотрансформацію дуже привабливою. Навпаки, хімічне окислення α-бісабололу с м-хлорпербензойна кислота не є селективною, що призводить до суміші продуктів епоксидування обох CC з поганим виходом.

Малюнок 6 . Деякі високотерпенові структури з промисловим інтересом.

Висока селективність ферментів робить ці біотрансформації біологічно активних молекул значущим інтересом через можливість отримання продуктів, які важко отримати шляхом хімічного синтезу і з імовірно кращими властивостями. Процеси здійснюються не виключно за допомогою мікробних ферментів. справді, мозоль з рослин використано. Це таксол ® , який є високоцінним препаратом у хіміотерапії раку. паклітаксел (таксол ® ) ( Малюнок 7 ) був ізольований від Taxus brevifolia кори лише з урожайністю 0,014%. Структуру Таксолу ® неможливо досягти шляхом повного хімічного синтезу. В додаток, T. brevifolia росте повільно (200 років бути виробником Taxol ®). Для покращення виробництва був проведений напівсинтез з 10-деацетил-Баккатин III, виробленого Європейським Taxus baccata листя (урожай 0,1%) виконано ( Малюнок 7 ). Ця альтернатива призводить до кращого загального врожаю, ніж при виділенні натурального продукту.

Малюнок 7 . Напівсинтез паклітакселу з 10-деацетил-баккатину III.

Біотехнологічною альтернативою є культура о мозоль від T. baccata листя та ферментація з використанням фарнезилдифосфату та ізопентенілпірофосфату як попередників, у результаті цього біосинтезу утворюється Баккатин III. Потім фенілсерин трансфераза каталізує ацилювання баккатину III до паклітакселу (110 мг л -1 кожні 2 тижні). Ця альтернатива з використанням зеленої біотехнології дозволяє виключити 11 хімічних етапів, зменшує використання органічних розчинників (особливо при силілюванні) і зменшує утворення багатьох відходів, одночасно збільшуючи загальний вихід.

Високе виробництво Таксолу ® відкрило можливість покращити фармакологічну активність та/або фармакокінетичний профіль, завдяки чому були проведені різні біотрансформації. Біоконверсія 2α,5α,10β,14β-тетра-ацетоксі-4(20),11-таксадієну грибами Cunninghamella elegans або Cunninghamella echinulata був обстежений. Відбулися реакції гідроксилювання та деацетилювання в кількох положеннях, що дає сполуку з таким же фармакологічним профілем, але легше для введення.

аргентатин B ( Малюнок 6 ) являє собою тетрациклічний тритерпен зі структурою циклоартанового типу. Було ізольовано від Parthenium argentatum і Партеній пухнастий. Мікробна трансформація призвела до 16,24-епоксициклоартан-3β,25-діолу (ізоаргентатин D) Nocardia corallina вар. taoka ATCC 31338 , мікобактерії вид NRRL B3683, або Septomyxa affinis ATCC 6737, який також виробляв 16,24-епоксициклоартан-3β,25-діол (аргентатин D) і 1,2-дідегідроаргентатин B (ізоаргентатин D). Тритерпени циклоартанового типу є лідерами у розробці потужних протипухлинних промоторів (хіміопревентивних засобів проти раку) [10].

Бетулін, бетулінова кислота та їх похідні ( Малюнок 6 Повідомляється, що вони проявляють різноманітні біологічні властивості, такі як протизапальну активність, інгібування реплікації вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ) у клітинах лімфоцитів H9, блокування проникнення ВІЛ типу 1 в клітини, інгібування ДНК-полімерази β та інгібування вплив на активацію раннього антигену вірусу Епштейна-Барр (EBV-EA). Препаративна біотрансформація бетулінової кислоти з використанням суспензії клітин спокою Каннінгхамелла sp. забезпечував глікозилювання з утворенням 28-О-β-d -глюкопиранозил-3β-гідрокси-луп-20(29)-ен-28-оат. Однак цей метаболіт не був активним проти досліджених ліній клітин меланоми порівняно з субстратом (бетуліновою кислотою) [14]. Ці результати свідчать про те, що група вільної карбонової кислоти є важливою для цитотоксичної активності проти меланоми. Інкубація бетулінової кислоти з суспензіями клітин, що спочивають, індукованих фенобарбіталом Bacillus megaterium ATCC 14581, Cunninghamella elegans, Mucor mucedo, і B. мегатерій ATCC 13368 призвів до виробництва метаболітів, окислених по-різному з високою активністю, порівняно з різними видами раку людини.


СИНДРОМІЧНЕ ОЖИРЯННЯ

Синдромні форми ожиріння часто асоціюються з фенотипами на додаток до тяжкого ожиріння з раннім початком. Це може бути викликано зміною одного гена або більшої хромосомної області, що охоплює кілька генів. Ожиріння є ознакою майже 100 синдромів, трохи більше половини поки не названі, а 13,9% мають більше однієї назви. 72 Супутні фенотипи часто включають інтелектуальну недостатність, дисморфію обличчя або специфічні аномалії системи органів. Найбільш частими формами синдромного ожиріння є синдром Барде Бідля і Прадера Віллі.

Синдром Барде-Біделя (BBS)

BBS – це рідкісна аутосомно-рецесивна циліопатія, що характеризується дистрофією сітківки, ожирінням, постаксіальною полідактилією, порушенням функції нирок, труднощами навчання та гіпогонадизмом. 73 Поширеність BBS помітно коливається між популяціями від 1:160 000 у північноєвропейських популяціях до 1:13 500 і 1:17 5000, відповідно, в ізольованих громадах Кувейту та Ньюфаундленду, де переважає вищий рівень спорідненості. Фенотип розвивається повільно протягом першого десятиліття життя, і часто єдиним проявом, що спостерігається при народженні, може бути постаксіальна полідактилія з іншими аномаліями кінцівок або без них. 74 Поступовий початок нічної сліпоти разом із світлобоязню та втратою центрального та/або кольорового зору є наступним остаточним висновком, який часто призводить до діагнозу. Ожиріння присутнє у переважної більшості (72�%) осіб, хоча вага при народженні може бути нормальною. Відзначається висока поширеність цукрового діабету 2 типу, гіпогонадизму, когнітивного дефіциту, лабільної поведінки, дефіциту мовлення, аномалій нирок і серця. 75 Біологічним дефектом синдрому є аномалія в нерухомих війках, які в першу чергу функціонують як сенсорні органели, що регулюють шляхи передачі сигналу. Функціональна одиниця нерухомих війок, або BBSome, складається з війки, базального тіла, шаперонінового комплексу та інших білків мембрани, які підтримують функцію війки. На момент написання цієї статті були ідентифіковані мутації в 16 різних генах, які змінюють функцію BBSome на різних рівнях (BBS1�S16). Повний огляд BBS можна знайти на GeneReviews (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK1363/).

Синдром Прадера Віллі (PWS)

PWS є найпоширенішою причиною синдромного ожиріння в усьому світі (1 на 15 000� 000 народжених). 76 Він характеризується важкою гіпотонією новонароджених, розладами харчової поведінки, що розвиваються в кілька фаз (від анорексії і нездатності розвиватися в ранньому дитинстві до важкої гіпофагії з харчовою компульсивністю приблизно до 4𠄸 років). 77 Додаткові ознаки включають дисморфію обличчя, глобальні когнітивні порушення, відхилення в поведінці, гіпотонію, затримку моторного розвитку та гормональні дефіцити, такі як гормон росту, гіпотиреоз, гіпогонадизм та аномалії греліну. 76 Генетичним дефектом PWS є інактивація критичної області Прадера-Віллі (PWCR), розташованої на ділянці 15q11-13 батьківської хромосоми. PWCR на материнській хромосомі імпринтується, а отже, епігенетично замовчується шляхом метилювання, що призводить до моноалельної експресії батьківських генів. 78 Більшість випадків PWS викликані інтерстиціальними делеціями батьківської області PWCR (65�%), тоді як інші - материнською однобатьківською дисомією (20�%) та мутаціями в центрі імпринтингу (2𠄵%). Принаймні 5 генів, розташованих в PWCR і експресованих в гіпоталамусі, були задіяні без чіткості їх ролі: MKRN3 (макорін 3), MAGEL2 (подібний MAGE 2), NDN (necdin), NPAP1 (білок 1, пов'язаний з ядерними порами), SNURF-SRPN (Рамка зчитування вище за SRPN – малий ядерний рибосомний білок 1). 79 Нещодавнє дослідження плюрипотентних стовбурових клітин, отриманих від нейронів у людей з мікроделецією в PWCR, вказує на нижчу експресію проконвертази 1 (PC1), яка раніше була причетною до моногенного ожиріння, що потенційно пропонує об’єднуюче пояснення фенотипу. 80

16p11.2 синдром мікроделеції

Це гетерозиготна делеція

Ділянка 593 kb на хромосомі 16 характеризується затримкою розвитку, інтелектуальною недостатністю та/або розладом спектру аутизму разом із тяжким ожирінням. Walter et al відзначили наявність тяжкого ожиріння у дітей з делецією та провели широкомасштабний аналіз, використовуючи когорти на основі популяцій та захворювань, щоб знайти збагачення делеції у дітей та їхніх батьків з ожирінням. 81 Подальші дослідження Бочукової та колег показують, що ожиріння, яке спостерігається у дітей і дорослих з делецією 16p11.2, може бути опосередковано через SH2B1, що знаходиться в області. 82

На додаток до PWS і синдрому делеції 16p11.2 було виявлено кілька інших синдромів, пов’язаних з ожирінням, з хромосомними дефектами. Ожиріння часто проявляється у багатьох, але не у всіх людей, що припускає різну пенетрантність або специфічний ген, який може бути по-різному залучений у різних людей. Приклади включають делецію 1p36 (синдром моносомії 1p36), 2q37 (синдром розумової відсталості брахідактилії BDMR), 6q16 (синдром PWS-подібний), 9q34 (синдром Кліфстра), 11p13 (синдром WAGR111) та синдром 17pSmi SMS. . 83 Ці синдроми можуть містити ключ до окремих генів у регіоні, які могли б додатково пояснити біологію захворювання, напр. наявність делеції в BDNF ген у осіб із синдромом WAGR, які також мали ожиріння. 63

У таблиці 2 наведено список синдромів, які, як відомо, пов’язані з ожирінням, синдромами надмірного росту (іноді їх плутають з ожирінням) і синдромами, генетична етіологія яких ще не з’ясована. Багато з цих синдромів охоплюють аномалії розвитку нервової системи різного спектру. Широкомасштабні дослідження, такі як дослідження асоціації всього геному, показали широке вираження локусів, пов’язаних з ІМТ в мозку. Цілком імовірно, що існує досі невідома спільна основа ожиріння та дефекту(ів) нервово-психічного розвитку. Однак через високу поширеність ожиріння в суспільстві та вплив нейропсихологічних препаратів на вагу, а також використання їжі як модулятора поведінки, наявність ожиріння може бути лише збентеженням. Тим не менш, дефекти нервово-психічного розвитку продовжують служити важливим маркером для розгляду генетичних досліджень у дітей з тяжким ожирінням на ранніх стадіях. Зацікавлений читач посилається на нещодавній систематичний огляд Kaur et al. 72

ТАБЛИЦЯ 2

A] СИНДРОМИ ІЗ ОСОБЛИВОСТІ
NAMEГЕНФенотип
MIM
Ген/Локус
MIM
КЛІНІЧНІ ОСОБЛИВОСТІРЕЖИМ
Спадщина
ХРОМОСОМНИЙ
ПОЗИЦІЯ
ГЕНЕТИЧНИЙ
ДЕФЕКТ
Синдром мікродуплікації 5p13NIPBL613174 Затримка розвитку, аутична поведінка, ожиріння, лімфедема, гіпертонія та макроцефаліян.е5p13Мікродуплікація
16p11.2 видалення?SH2B1611913 Аутизм, важке раннє ожиріння, інтелектуальна недостатність, вроджені аномалії-16п11.2del
Спадкова остеодистрофія Олбрайта/PHP типу 1 aGNAS103580139320Брахіметафлангізм, низький зріст, ожиріння та розумова відсталістьн.е20q13.32MS, FS, NS, SS, індел
Синдром АльстромаМИЛОСТИЯ1203800606844Сліпота, порушення слуху, дитяче ожиріння, інсулінорезистентність і СД2AR2p13.1FS, NS, MS
Синдром Барде Біделя (BBS) Пігментний ретиніт, ожиріння, дисфункція нирок, полідактилія, поведінкова дисфункція та гіпогонадизм
BBS 1BBS1209900209901 AR, DR11q13.2MS, NS, SS, FS
BBS 2BBS2615981606151 AR16q13MS, NS, FS, SS, Дублювання
BBS 3ARL6209900608845 AR3q11.2НС, діл
BBS 4BBS4615982600374 AR15q24.1MS, NS, SS, дел
BBS 5BBS5615983603650 AR2q31.1MS, FS, SS, дел
BBS 6МККС605231604896 AR20p12.2MS, FS
BBS 7BBS7615984607590 AR4q27FS, MS, NS, дел
BBS 8TTC8615985608132 AR14q31.3MS, SS, indel
BBS 9PTHB1615986607986 AR7p14.3FS, SS, дел
BBS 10BBS10615987610148 AR12q21.2MS, NS, FS, SS, дел
BBS 11TRIM32615988602290 AR9q33.1MS, FS
BBS 12BBS 12615989610683 AR4q27MS, NS, FS, діл
BBS 13MKS1615990609883 AR17q22РС
BBS 14CEP290615991610142 AR12q21.32NS
BBS 15WDPCP615992613580 AR2p15Н.С., С.С
BBS 16SDCCAG8615993613524 AR1q43-44Н.С., С.С
BBS 17LZTFL1615994606568 AR3p21.31MS, NS
BBS 18BBIP1615995613605 AR10q25.2NS
BBS 19IFT27615996615870 AR22q12.3СС
BBS 20IFT172617119608040 AR2p23.3СС
BBS 21C8ORF37617406614477 AR8q22.1РС
Синдром Боржесона-Форссмана-ЛеманаPHF6301900300414Важка інтелектуальна недостатність, епілепсія, мікроцефалія, низький зріст, ожиріння, гіпогонадизм і гінекомастіяXLRXq26.2NS, MS, усічення
Синдром КарпентераRAB23201000606144Акроцефалія зі змінним синостозом, вадами розвитку мозку, дисморфією обличчя, аномаліями кінцівок, вадами серця, розумовою відсталістю, затримкою росту, гіпогеніталізмом та ожиріннямAR6п12.1-п11.2MS, FS, SS, дел
Синдром ЧОПС*AFF4616368604417Когнітивні порушення, грубий вигляд, вади серця, ожиріння, ураження легень, низький зріст і скелетна дисплазіян.е5q31.1MS, SS, del, dup, LOF
Синдром Чадлі-ЛоуріATRX309580300032розумова відсталість, низький зріст, легке ожиріння, гіпогонадизм і дисморфізмXLRXq21.1LOF
Синдром КоенаVPS13B/COH1216550 Затримка розвитку, дисморфізм обличчя, мікроцефалія, дистрофія сітківки, тулубне ожиріння, в’ялість суглобів і періодична нейтропеніяAR8q22.2MS, NS, del, dup, CNV
Синдром Кабукі/Синдром Ніікава-КурокіKMT2D/MLL2/ALR/KABUK1147920602113Гештальт обличчя, інтелектуальна недостатність, вісцеральні та скелетні вади розвитку та постнатальний низький зріст із зайвою вагоюн.е12 кв. 13.12НС, ФС, діл
Синдром КлефстраEHMT1610253607001Розумова відсталість, ожиріння, гіпотонія, брахіцефалія, характерні риси обличчя, аномалії серцян.е9q34.3НС, ФС, діл
Синдром MORMINPP5E610156613037Помірна розумова відсталість, тулубне ожиріння, вроджена непрогресуюча дистрофія сітківки та мікропенісAR9q34.3NS
Синдром Прадера-ВілліMKRN3/ZNF127/MAGEL2/SRPN176270 Нездатність розвиватися & труднощі з годуванням у дитинстві, ожиріння & гіперфагія, що починається в дитинстві, гіпотонія, низький зріст, затримка розвитку, маленькі руки і ноги, гіпоплазія геніталій 15q11.2del, однобатьківська дисомія
Синдром Рубінштейна-ТайбіCREBBP180849600140Низький зріст, ожиріння, дисморфія обличчя, проблеми із зором, проблеми з харчуванням, викривлення хребтан.е16p13.3NS, MS, FS, SS, дел
Розумова відсталість, пов'язана з Shashi-XRBMX Грубе обличчя, розумова відсталість, виступаюча нижня губа, велике яєчко та ожирінняXLR NS, SS, MS
Синдром Сміта МагенісаRAI1182290607642Інтелектуальна недостатність, затримка мови та мови, порушення сну, поведінкові проблеми та ожиріннян.е17п11.2microdel, MS, FS, NS
синдром WAGROBDNF612469612469Пухлина Вільмса, анірідія, аномалії сечостатевої системи, розумова відсталість та ожиріння?AD11p13-p12мікродель, хром інверсія
OBHDНТРК2613886600456Ожиріння, гіперфагія та затримка розвитку, погіршення пам’яті та порушення навчання?AD9q21.33РС
Ульнарно-мамарний синдромTBX3181450601621Дефіцит задньої кінцівки, гіпоплазія апокринових/молочних залоз, затримка статевого дозрівання, аномалії статевих органів та ожиріннян.е12q24.21MS, NS, дел
Безіменний синдром 1CUL4B300354300304Затримка статевого дозрівання, гіпогонадизм, макроцефалія, низький зріст, центральне ожиріння, проблеми з поведінкою, кавус, аномальні пальці нігXLRXp24MS, SS, дел
Безіменний синдром 2UBE2A300860312180Дисморфічна фація, велика голова, синофіри, низька лінія волосся, маленькі геніталії, судоми, розумова відсталість, зайва вага та ожирінняXLRXp24MS, NS, дел
B] СИНДРОМИ ЗАЛИШЕННЯ
NAMEГЕНФенотип MIMГен/локус MIMКЛІНІЧНІ ОСОБЛИВОСТІРЕЖИМ СпадкуванняХРОМОСОМНЕ ПОЛОЖЕННЯГЕНЕТИЧНИЙ ДЕФЕКТ
Синдром Баннаяна-Райлі-РувалькабаPTEN153480601728Макроцефалія, псевдопапіледема, множинні гемангіоми, ліпомин.е10q23.31MS, NS, SS, дел
Синдром Беквита-ВейдеманаICR1/H19/KCNQ1OT1/CDKN1130650різноманітніМакросомія, макроглосія, ущелина піднебіння, вісцеромегалія, складки мочки вуха, неонатальна гіпоглікемія, ембріональні пухлини, гемігіперторфіян.е11p15.5del, MS
Синдром Кліппеля-Треноне-Вебера-14900-Велика шкірна гемангіома з гіпертрофією суміжних кісток і м’яких тканин-8q22.3
Синдром Паркса ВебераRASA1608355139150множинні артеріовенозні мальформації під шкірою, скелетна гіперторфія-5q13.3MS, FS, NS, діл
Синдром ПротеяAKT1176920164730асиметричне та непропорційне надмірне розростання однієї або кількох ділянок тіла, судинні мальформації, невуси та аномальна жирова тканинамозаїцизм14q23.31
Синдром Сільвера-Рассела-180860-Трикутне обличчя з широким чолом і загостреним, невеликим підборіддям з широким ротом, затримка росту (низький зріст, IUGR), гемігіперплазія-7p11.2
Синдром Сімпсона-Голабі-БемеляGPC3312870300037Пре- та післяпологовий надмірний ріст, грубе обличчя, вади серця, інші вроджені аномаліїXLRXq26.2MS, SS, NS
Синдром СотосаНСД1117550606681макроцефалія, надмірний ріст, затримка розвитку, пізній кістковий вік, гіпотонія, гіперрефлексія, затримка рухів, великі руки і ноги, можуть бути пов’язані з пухлинамин.е5q35НС, ФС, діл
Синдром ВівераEZH2277590601573макроцефалія, легка гіпертонія, пізній кістковий вік, лобова боротьба, широкий великий палець, контрактури ліктів, труднощі з навчанням, аномалії кінцівокн.е7q36.1NS, MS, дел
C] ГЕНЕТИЧНО НЕЗ'ЄДНЕНІ СИНДРОМИ
NAMEГЕНФенотип MIMГен/локус MIMКЛІНІЧНІ ОСОБЛИВОСТІРЕЖИМ СпадкуванняХРОМОСОМНЕ ПОЛОЖЕННЯГЕНЕТИЧНИЙ ДЕФЕКТ
Синдром Камера-Маруго-Коена-604257-Ожиріння, низький зріст, розумова недостатність, гіпогонадизм, мікропеніс, контрактури пальців, ущелина губи---
Синдром Кларка-Барайцера-300602 Макроцефалія, розумова відсталість, ‘квадратний’ лоб, помітні риси обличчя, високий зріст, великі вуха, ожиріння та макроорхізм---
Синдром МЕХМО-300148-Розумова відсталість, епілептичні напади, гіпогонадизм, мікроцефалія та ожиріння«МітохондріальніXp22.13-p21.1-
Синдром MOMES-606772-Розумова відсталість, ожиріння, блефарофімоз, астигматизм, гіпоплазія верхньої щелепи, прогнатизм нижньої щелепи?AR--
Синдром МОМО-157980 Макросомія, ожиріння, макроцефалія, аномалії зору---
Синдром Моргані-Стюарта-Мореля-144800-Внутрішній гіперостоз, галакторея, гіперпролактинемія, цукровий діабет, гіперфосфатазія, ожиріння, гіпертрихоз?AD--
синдром делеції 1p36-607872-Гіпотонія, затримка розвитку, аномалії росту, ожиріння та черепно-лицевий дисморфізм-1p36del
синдром делеції 2p25.3MYTL1616521-Інтелектуальна недостатність, ожиріння, проблеми з поведінкою, порушення снун.е2p25.3del

AD = аутосомно-домінантний, AR = аутосомно-рецесивний, XLR = Х-зчеплений рецесивний, MS = міссенс-мутація, NS = нонсенс, SS = місце зрощення, LOF = втрата функції, del = делеція, dup = дублювання.

Для повного опису та посилань зверніться до Інтернет-менделівського спадкування в людини: omim.org, використовуючи номери MIM. Додаткова інформація в Gene Reviews: Pagon RA, Adam MP, Ardinger HH та ін., редактори. GeneReviews ® [Інтернет]. Сіетл (Вашингтон): Вашингтонський університет, Сіетл 1993�. Доступно з: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK1116/


МА ділянок. Репрезентативні графіки MA, що порівнюють результати масиву всередині D. simulans і між видами.

Дані масиву без маски. Оброблені дані для 48 масивів Affymetrix, використаних для аналізу семи видів після згладжування Лесу та корекції фону + нормалізації за допомогою MAS5 без маскування (див. текст). У список входять гени з ділянками, що кодують білок Drosophila melanogaster анотація геному (реліз 4.3). Колонки: A. Ensembl - анотація CG/CR, надана Affymetrix, B. Chromosome, C. Strand - + sense/- antisense, D/E. Пуск/Зупинка з версії 4.3, F. ідентифікатор набору датчиків Affymetrix, G-I. Копії для Drosophila melanogaster, J-L. D. sechellia, М-0. D. Mauritiana, П-Р., D. teissieri, S-U Д. якуба, V-Y. D. santomea, Z-BB Повторює 10 хрестів (по 3) з D. simulans.

Дані масиву з маскою. Оброблені дані для 48 масивів Affymetrix, використаних для аналізу семи видів після згладжування лесу та корекції фону + нормалізації за допомогою MAS5 після маскування зонда (див. текст). A-F Те саме, що й додатковий файл 2, G. Кількість зондів у наборі зондів, видалених шляхом маскування, H-N. Середні значення для семи видів, O-BJ. див. Додатковий файл 2.

Серед видів аналіз ковзних вікон. p-значення, визначені для кожного вікна в аналізі серед видів. Значення p вказано в рядку першого гена розглянутого вікна. A-G Те саме, що додатковий файл 3. Кількість генів H., що використовуються для обчислення значень, I. статистика власних значень, J. p-значення, для розміру вікна з 2 генами, L-BL. те саме для вікон розмірів 3�.

Об’єднані вікна серед видів 1. Об’єднані вікна виявлено значущими при p-значенні = 0,05 у аналізі між видами. A-G Те саме, що додатковий файл 3. H-Z. Розміри вікон 2�.

Об’єднані вікна між видами 2. Результати повторення аналізу ковзних вікон при видаленні одного виду за раз. Кожен розмір вікна представляє кількість значущих вікон, знайдених під час аналізу всіх видів, а числа в дужках відображають діапазон значущих вікон, ідентифікованих під час повторення аналізу, видаляючи один вид за раз.

Drosophila simulans аналіз ковзного вікна. p-значення, визначені для кожного вікна в D. simulans аналіз. Значення p вказано в рядку першого гена розглянутого вікна. A-BL те саме, що додатковий файл 4.

Об’єднані вікна Drosophila simulans 1. Об’єднані вікна виявлено значущими при p-значенні = 0,05 в D. simulans аналіз. A-G Те саме, що додатковий файл 5. H-Z. Розміри вікон 2�.

Об’єднані вікна Drosophila simulans 2. Набори паралогічних генів і представлення цих наборів серед значущих вікон, ідентифікованих за p-значення < 0,001. A-C Розташування хромосом та назви паралогічних пар генів. Зверніть увагу, що деякі з них об’єднуються в більші набори паралогових генів (виділені жовтим або зеленим кольором). D-H. Результати аналізу серед видів ("AS"), тобто. розмір вікна, що використовується в аналізі, кількість значущих вікон (числа відповідають Таблиці ​ Таблиця 1), 1 ), кількість цих вікон, які містять паралогічні, кількість паралогів у значущих вікнах, кількість паралогів не у значущих вікнах. І-М. Аналогічні результати аналізу всередині D. simulans ("WS").

Надмірно представлені класи генів. Класи генів, надмірно представлені в кластерах спільної експресії, ідентифіковані за допомогою DAVID (див. текст). Результати представлені для аналізу між видами та для аналізу всередині D. simulans для розміру вікна 2 при граничному значенні p-значення = 0,001. Представлено класи з p-значеннями < 0,05, визначеними DAVID.


Вступ

Регуляція на рівні транскрипції є одним з основних механізмів, за допомогою яких бактерії адаптують свій метаболізм до мінливого середовища. У відповідь на цю екологічну або внутрішню динаміку контроль експресії генів здійснюється головним чином за допомогою факторів транскрипції (TF), білків, які специфічно зв’язують сайти зв’язування TF (TFBS) або цис-регуляторні мотиви і, у свою чергу, змінюють модель експресії нижчестоящого(их) гена(ів) 1,2.

Геноми бактерій організовані у вигляді оперони, група генів у тандемі, що мають термінатор і промотор, кожен із яких містить один або більше TFBS. Максимальна кількість корегульованих оперонів під прямим контролем певних TF(s) називається регулоном, термін, який вперше ввів Маас. та ін. у 1964 році 3 . Вивчення координації клітинної поведінки у відповідь на внутрішні або зовнішні сигнали на рівні транскрипції як вирішального аспекту мікробної геноміки залежить від нашої здатності правильно з’ясувати всі ці регулони або іншими засобами глобальної регуляторної мережі транскрипції (TRN) бактерії.

Хоча найбільш бажаним способом з’ясувати весь набір регулонів у бактерії є експеримент, існують серйозні проблеми. Крім того, що це дуже дорого і вимагає багато часу 4 , лабораторне з’ясування всіх регулонів вимагає від дослідників точно знати, які умови викликають які регулони. Тому повинні бути відомі всі умови, які призведуть до активації всіх регулонів, процедура, яка здається поки неможливою 5 . Більше того, багато досліджень бактеріального TRN використовують профілі експресії генів для прогнозування взаємодії TF та їх цільових TFBS 6,7,8. Однак у цьому припущенні є дві проблеми: (a) не завжди коекспресована ситуація означає корегуляцію 9 і (b) посттранскрипційна регуляція TF також може відбуватися, і в цій ситуації клітинний рівень TF є постійним. однак діяльність змінюється. Ці проблеми також можуть поставити під загрозу всі передбачення.

З цією метою були розроблені обчислювальні інструменти, щоб з’ясувати всі спільно-регульовані оперони, закодовані в бактеріальних геномах, з їхньою основною метою знайти максимальні набори оперонів, які спільно зберігають цис-регулятивні мотиви (або коротко, мотиви) 10,11,12 . Для цього ab initio Висновок регулона, мотиви повинні бути скановані для всіх оперонів за допомогою техніки філогенетичного відбитка. Після введення в 1988 році 13 філогенетичний відбиток значно покращив процес ідентифікації обчислювальних мотивів за допомогою порівняльного геномного аналізу близькоспоріднених організмів 14 . Знаходження мотивів усіх оперонів у бактеріальних геномах дозволяє для подальшого аналізу групувати консервативні та подібні мотиви з думкою, що вони будуть демонструвати подібну регуляційну модель, таким чином класифікуючи як регулон. Прогнозування регулона або реконструкція TRN є ключем до розуміння функції гена та еволюції досліджуваної бактерії.

Lactococcus lactis є одним з найбільш вивчених представників молочнокислих бактерій (LAB) і може бути класифікований на різні підвиди. З них, L. lactis subsp. lactis і L. lactis subsp. cremoris демонструє високий біотехнологічний потенціал, починаючи від їх широкого застосування у виробництві кисломолочних продуктів 15, а також у формуванні смаку 16 і виробництві молочної кислоти (підп. lactis і cremoris) 17 до їх впровадження як систем доставки ліків для багатьох терапевтичних білків (підп. lactis) 18,19 . Крім того, різні штами L. lactis subsp. lactis відомі як продуценти бактеріоцину. Лантибіотик низин, найбільш інтенсивно досліджуваний і використовуваний бактериоцин, є першим антимікробним пептидом, схваленим FDA для використання як харчовий консервант і виробляється багатьма штамами L. lactis subsp. lactis 20 . Згідно з іншими дослідженнями, були запропоновані нові застосування низину в біомедичній галузі, наприклад, його потенціал у лікуванні кишкових інфекцій товстої кишки 21, субклінічного маститу великої рогатої худоби 22, а також його синергетична роль у лікуванні пухлин голови та шиї та колоректального раку 23 ,24 і пан-резистентні інфекції 25,26,27 . Завдяки вищезгаданим потенціалам було проведено багато досліджень для виявлення молекулярної основи виробництва низину, а також інших важливих особливостей цієї бактерії для розуміння біологічних основ і покращення цих потенціалів, таких як дослідження виробництва низину або бактеріальної клітини. покращення зростання в різних умовах, що стосуються різних галузей.

L. lactis subsp. lactis IO-1 є дуже потужним штамом у виробництві L-лактату з ксилози, а також глюкози, який пропонується як перспективний кандидат для використання в промисловості зелених пластмас для виробництва полімолочної кислоти (PLA) 28 . Штам також продукує природний варіант низину, низин Z 29, який відрізняється від типового пептиду низину А лише однією амінокислотою, що призводить до більшої розчинності низину Z при фізіологічному рН, що робить його більш придатним кандидатом для біомедичних застосувань.

Оскільки також доведено, що виробництво антибіотиків жорстко регулюється на рівні транскрипції 30 , у цій роботі ми розглядали реконструкцію глобальної TRN L. lactis subsp. lactis IO-1 за допомогою успішного підходу на основі філогенетичного відбитка, який дав можливість краще зрозуміти та вивчити регуляторну поведінку організму, передбачивши всі його регулони на основі геномних даних.


Розділ 18

PowerShow.com є провідним веб-сайтом для обміну презентаціями/слайд-шоу. Незалежно від того, чи є ваша програма бізнесом, інструкціями, освітою, медициною, школою, церквою, продажами, маркетингом, онлайн-навчанням чи просто для розваги, PowerShow.com — чудовий ресурс. І, що найкраще, більшість його цікавих функцій безкоштовні та прості у використанні.

Ви можете використовувати PowerShow.com, щоб знайти та завантажити приклади онлайн-презентацій PowerPoint ppt практично на будь-яку тему, яку ви можете собі уявити, щоб ви могли безкоштовно навчитися покращувати власні слайди та презентації. Або використовуйте його, щоб знайти та завантажити високоякісні презентації PowerPoint ppt з ілюстрованими чи анімованими слайдами, які навчать вас робити щось нове, також безкоштовно. Або використовуйте його, щоб завантажити власні слайди PowerPoint, щоб ви могли поділитися ними зі своїми вчителями, класом, учнями, керівниками, співробітниками, клієнтами, потенційними інвесторами чи іншим світом. Або використовуйте його для створення справді крутих слайд-шоу з фотографій – із 2D- та 3D-переходами, анімацією та вибором музики, – якими ви можете поділитися з друзями у Facebook або колами Google+. Це все також безкоштовно!

За невелику плату ви можете отримати найкращу в галузі конфіденційність у мережі або публічно рекламувати свої презентації та слайд-шоу з найвищими рейтингами. Але крім того, це безкоштовно. Ми навіть перетворимо ваші презентації та слайд-шоу в універсальний формат Flash з усією їхньою оригінальною мультимедійною славою, включаючи анімацію, 2D та 3D ефекти переходу, вбудовану музику чи інше аудіо чи навіть відео, вбудоване у слайди. Все безкоштовно. Більшість презентацій і слайд-шоу на PowerShow.com безкоштовні для перегляду, багато з них навіть можна безкоштовно завантажити. (Ви можете вибрати, чи дозволяти людям завантажувати оригінальні презентації PowerPoint та слайд-шоу з фотографій за окрему плату чи безкоштовно чи взагалі ні.) Перевірте PowerShow.com сьогодні – БЕЗКОШТОВНО. Для кожного справді щось знайдеться!

презентації безкоштовно. Або використовуйте його, щоб знайти та завантажити високоякісні презентації PowerPoint ppt з ілюстрованими чи анімованими слайдами, які навчать вас робити щось нове, також безкоштовно. Або використовуйте його, щоб завантажити власні слайди PowerPoint, щоб ви могли поділитися ними зі своїми вчителями, класом, учнями, керівниками, співробітниками, клієнтами, потенційними інвесторами чи іншим світом. Або використовуйте його для створення справді крутих слайд-шоу з фотографій – із 2D- та 3D-переходами, анімацією та вибором музики, – якими ви можете поділитися з друзями у Facebook або колами Google+. Це все також безкоштовно!


Розвиток Т-клітинного імунітету

D Використання інструментів відстеження походження

Комбіноване застосування тканиноспецифічних Cre мишей рекомбінази та мишей-репортерів Rosa26 є інструментом для визначення зв’язку між популяціями клітин у лімфоїдних тканинах. Було створено ряд різних флуоресцентних, біолюмінесцентних та lacZ-кодованих репортерних штамів мишей lox-stop-lox. Найпопулярнішими штами, які зараз використовуються, є репортерні штами Rosa26 eYFP і Rosa26 ACTB-tdTomato/EGFP. 41,42 Клітини Rosa26 eYFP не є флуоресцентними, і лише після опосередкованого Cre вирізання зупинки транскрипції вони можуть почати експресувати eYFP. І навпаки, репортерні клітини Rosa26 ACTB-tdTomato/EGFP експресують пов’язаний з мембраною флуоресцентний білок dtTomato на високих рівнях у всіх тканинах, а потім експресують пов’язаний з мембраною eGFP після опосередкованої Cre рекомбінації. Перевага цього другого штаму мишей полягає в тому, що промоторний елемент ACTB стимулює сильнішу експресію флуоресцентних білків порівняно з нативним локусом Rosa26. У наших руках аналіз експресії mGFP в лімфоїдних тканинах від Rosa26 ACTB-tdTomato/EGFP репортера виявив 10-кратне збільшення флуоресценції в порівнянні з мишами Rosa26 eYFP як за допомогою проточної цитометрії, так і за допомогою багатофотонної візуалізації. Оскільки опосередкована Cre делеція lox фланкованого сигналу зупинки транскрипції в генетичних репортерах є постійною, все потомство клітин, які експресують або експресують Cre, генетично мічені. У найближчому майбутньому ми віримо, що специфічні для строми мишачі лінії Cre забезпечать потужну технологію для відстеження зв’язків між різними популяціями клітин строми.


Перегляньте відео: Bakterilerde Konjugasyon Animasyonu (Листопад 2022).